ا!ور ا!زا ر ادراط ا وزارة ا"م ا و اث ا" قسم البيولوجيا والبيي ة النباتية مذكرة دنطرف زردومي سليمان للحصول على شهادة بيولوجيا وفيزيولوجيا النبات في

Transcript

1 ا!ور ا!زا ر ادراط ا وزارة ا"م ا و اث ا" Université Ferhat Abbas Sétif 1 Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie! رت 'س طف " '"وم اط و اة 1 N.... /SNV/2014 قسم البيولوجيا والبيي ة النباتية مذكرة دنطرف زردومي سليمان للحصول على شهادة بيولوجيا وفيزيولوجيا النبات في ماجستير تخصص: تثمين الموارد النباتية اووع ط Artemisia campestris L آرس درا ر ودرا اط اد ر واد د ز ا. نوقشت بتاريخ 2015/.../... أمام لجنة المناقشة الري يس : لعور حسين أستاذ جامعة فرحات عباس - سطيف سطيف - سطيف المشرف: شاكر عادل نجيب الممتحنون: دحامنة صليحة أستاذ جامعة فرحات عباس أستاذ جامعة فرحات عباس - سطيف -1 لقرادة تقية أستاذ محاضر أ جامعة فرحات عباس مخبر تثمين الموارد الطبيعية

2 تشكرات : الحمد الله حمدا كثيرا كما ينبغي لجلال وجهه وعظيم سلطانه. أتقدم بالشكر الجزيل إلى البروفيسور عادل نجيب شاكر الذي لم يبخل علي بتوجيهاته ونصاي حه القيمة طيلة إشرافه على هذا العمل كما أتقدم بالشكر الجزيل الى كل من ساعدوني سواء من قريب أو من بعيد في إنجاز هذه المذكرة وأخص بالذكر الا ستاذة حبيبة بوخبتي الا ستاذ رمضاني الا ستاذة دحامنة وفريق عملها زملاي ي في الدفعة صبرينة عمي قدور... كما أتقدم بالشكر إلى ري يس اللجنة وأعضاي ها لقبولهم مناقشة هذا البحث.

3 اھاء أهدي هذا العمل المتواضع إلى أبي وأمي وأخوتي إلى كل أصدقاي ي وأخص بالذكر : إبراهيم بلال رياض هشام هشام. إلى كل طلبة الماجستير دفعة 2011.

4 قاي مة الجداول : الجدول العنوان الصفحة 16 Artemisia campestris 1 مركبات الفلافونويد الري يسية الموجودة في : 40 النشاطية الضد بكتيرية للزيت الا ساسي للنبتة Artemisia campestris (ملم) النشاطية الضد بكتيرية للمضادات الحيوية المعبر عنها بالميليمتر. 44.Artemisia campestris جدول يبين CI50 للزيت الا ساسي للنبتة ومحلولBHT. 4 I

5 قاي مة الا شكال : الشكل العنوان الصفحة 18 الا نماط المختلفة للبنيات المسو ولة عن تشكل الزيوت الا ساسية وحدة الا زوبرين تصنيف التربينات وفق ا لعدد وحدات الا زوبرين الداخلة في تركيبها بعض بنية مركبات الداخلة في تركيب الزيوت الا ساسية 4 26 المستخدم جهاز Clevenger في عملية التقطير الماي ي صور فوتوغرافية للنبتة في بيي تها الطبيعية جهاز الكليفجر المستخدم لاستخلاص الزيت الا ساسي للنبتة A.campestris خطوات دراسة النشاطية التثبيطية للمستخلص الزيتي الشكل الحر والمرجع لDPPH للنبتة A.campestris مقطعين عرضيين في ساق فتية للنبتة Artemisia campestris مقطع عرضي في ساق نبتة Artemisia campestris يظهر يظهر البشرة مقطع عرضي في ساق نبتة توزع الحزم الوعاي ية في ساق نبتة Artemisia campestris Artemisia campestris يظهر القشرة مقطع عرضي في ساق نبتة Artemisia campestris يظهر اللب مقطع عرضي في ورقة نبتة Artemisia campestris شكل الثغور وتوزعها على بشرة الوجه السفلي للورقة تا ثير الزيت الا ساسي على مختلف السلالات المختبرة منحنى النشاطية الضد تا كسدية للزيت الا ساسي للنبتة Artemisia campestris منحنى النشاطية الضد التا كسدية لل BHT المسجلة في اختبار DPPH II

6 II

7 قاي مة الا ختصارات : %50.absorbance :Abs.2,6-di-tert-butyl-4-méthylphénol :BHT هو مقياسلمدى فعالية مركبفيتثبيطنسبة وحدات مشكلة للمستعمرات. منظيفة بيولوجيةأو كيمياي ية حيوية معينة :CI 50 :CFU. Chloramphénicol:C. Dimethyl Sulfoxide:DMSO.2,2-diphenylpicrylhydrazyl : DPPH USFDA أو إدارةالغذاء والدواء FDA. Erythromycine:E : ( food and drug Administration) FDA : GC- MS الكروماتوغرافيا الغازية والمطيافية الكتلية. :(. Gentamicine:GM الزيوت الا ساسية. بروتيندهني منخفضالكثافة :HES low density lipoprotein ) LDL National Committee for Clinical Laboratory Standards :NCCLS. Oxacilline :OX. Penicilline :P III

8 الفهرس مقدمة... 1 الجزء النظري : 1 -الفصل الا ول : النباتات الطبية 1-1 -تعريف النبات الطبي المركبات 1- الفعالة للنباتات الطبية التعرف على النباتات الطبية جمع وحفظ النباتات الطبية تحضير الا دوية العشبية طرق أخذ الا دوية العشبية الا نسجة النباتية.Les tissus végétaux -8-1 نبتة Artemisia campestris التسمية وصف النبتة التصنيف الاستخدام التقليدي Artemisia campestris النشاط البيولوجي التركيب الكيمياي ي VI

9 2- الفصل الثاني : الزيوت الا ساسية 1-2 -تعريف الزيوت الا ساسية مكان تواجدها في النبتة كيمياء الزيوت الا ساسية الخصاي ص الفيزياي ية والكيمياي ية للزيوت الا ساسية إستخدامات الزيوت الا ساسية النشاط البيولوجي لزيوت الا ساسية 7-2- آلية عمل الزيوت الا ساسية سمية الزيوت الا ساسية طرق إستخلاص الزيوت الا ساسية التقطير الماي ي العوامل التي تو ثر على جودة الزيوت الا ساسية الجزء التطبيقي : -3 الفصل الثالث : المواد والطرق المستعملة 1-3 -المادة النباتية أوساط الزرع المضادات الحيوية السلالات البكتيرية المذيبات... 29

10 -6-3 الملونات المواد الكيمياي ية الا جهز طريقة العمل تحضير المقاطع النباتية للدراسة التشريحية استخلاص الزيت الا ساسي للنبتة حساب مردود الزيت الا ساسي اختبار النشاطية الضد بكتيرية للمستخلص الزيتي اختبار النشاطية الضد تا كسدية للزيت الا ساسي مبدأ عمل طريقة ال 34...DPPH طريقة العمل الفصل الرابع : النتاي ج و المناقشة -1-4 الدراسة التشريحية استخلاص الزيت الا ساسي النشاطية الضد بكتيرية للزيت الا ساسي النشاطية الضد تا كسدية النتيجة العامة المراجع الملاحق

11 الملخص: تظهر المقاطع العرضية التي أنجزت على مستوى ساق نبتة Artemisia campestris أ ا تتشكل من أربعة أنسجة مختلفة هي البشرة القشرة الا وعية الناقلة اللب. كما أظهرت المقاطع المنجزة على مستوى أوراق هذه النبتة كذالك وجود أربعة أنسجة وهي البشرة الحزم الوعاي ية محاطة بنسيج برانشيمي عادي يليه النسيج العمادي ذو الخلايا المتطاولة والمتراصة. الزيت الا ساسي للنبتة أظهر نشاطية ضد بكتيرية ضعيفة جدا فمن بين الا ربع سلالات المختبرة P. aeruginosa ATCC27853 E. coli ATCC S.aureus ATCC ) وجد أ ا تو ثر فقط على سلالة S.aureus ATCC وهي واحدة ( B. subtilis ATCC 6633 حيت وجد أن قطر التثبيط يزيد بزيادة تركيز الزيت الا ساسي ففي تركيز %20 وجد قطر التثبيط أنه يساوي ملم 10 % ملم بينما في تركيز 14 يساوي %50 وفي تركيز 35 وجد أنه يساوي 100 ملم. تقييم النشاطية الضد تا كسدية للزيت الا ساسي للنبتة Artemisia campestris باستعمال اختبار DPPH أظهر أ ا هي الا خرى ضعيفة فقد وجدت النشاطية الضد تا كسدية لهذا الزيت الا ساسي تساوي µg/ml الكلمات المفتاحية: للا كسدة.DPPH الزيوت الا ساسية Artemisia campestris الفعالية المضادة للميكروبات الفعالية المضادة

12 Résumé: les coupes anatomiques réalisées au niveau des tiges d'artemisia campestris ont montré qu'elles sont composées de quatre tissus différents : l'épiderme, l'écorce, les faisceaux conducteurs et la moelle. En outre, les coupes transversales au niveau des feuilles ont montré la présence de quatre tissus : l épiderme, les faisceaux conducteurs entourés par un tissu parenchymatique puis par un parenchyme palissadique. L étude de l activité antibactérienne de l'huile essentielle de cette plante a montré une très faible activité. Parmi les quatre souches testées: (S.aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922, P. aeruginosa ATCC27853, B. subtilis ATCC 6633), seule la souche S.aureus ATCC a été affectée, où il a été constaté que le diamètre de l inhibition augmente avec l augmentation de la concentration de l huile essentielle, en effet à la concentration de 20% le diamètre d'inhibition est de 10 mm, à la concentration de 50% il est de 14 mm et finalement à la concentration de 100% il est de 35 mm. Aussi, l étude de l'activité antioxydante de L'huile essentielle de cette plante par le test DPPH a montré une faible activité, de l'ordre de µg/ml Mots-clés: huiles essentielles, Artemisia campestris, activité antimicrobienne, activité antioxydante, DPPH

13 ا مقدمة : اعتمد الا نسان منذ القدم على الطبيعة من أجل توفير احتياجاته الا ساسية كالغذاء الما وى الملبس وحتى لتلبية إحتياجاته الطبية و من هنا نجد أن استخدام النباتات من طرف الا نسان كعلاج للا مراض قديم جد ا و تطور مع تطور البشرية فقد عرفت الحضارات القديمة استعمالا واسعا للنباتات الطبية في الصين مهد التداوي بالا عشاب في الهند والشرق الا وسط ) خاصة في العصر الا سلامي) اليونان والرومان احتلت هذه النباتات مكانة ري يسية في استعمالا م اليومية. هناك العديد من الا سباب وراء الموجة الحالية من الا هتمام بالطب الشعبي الخوف من العقاقير المصنعة أحد هذه الا سباب كلنا نعلم أن الا دوية المصنعة لها آثار واضحة في العلاج ولكننا نعلم أيضا ما لها من تا ثيرات جانبية في خلال حقبة زمنية واحدة تمت مراجعة نصف الا دوية التي أجاز ا إدارة الغذاء والدواء الا مريكية (FDA) بشا ن أعراضها الجانبية غير المتوقعة ولكن هناك سبب آخر للاهتمام المتزايد بالا دوية العشبية حيث تحتويكل الا عشاب على الا لاف من المواد الكيمياي ية فعند اختيار دواء عشبي فا ننا نتحصل على خليط من المواد الكيمياي ية أما عندما نتناول عقارا صيدلانيا يحتوي على مادة واحدة فعالة اصطناعية فسوف تساعدك فقط إذاكانت لهذه المادة فعالية مثبتة وكان التشخيص سليما ولكنها قلما تعالج مشاكل أخرى ثانوية والتي قد يوجد لدينا الكثير منها ) ديوك 2003 ). أصبحت صناعة الا دويةكذلك تعتمد وبشكلكبير على تنوع النباتات و مركبا ا الثانوية للعثور على جزيي ات جديدة ذات خصاي ص بيولوجية مفيدة هذا المصدر يبدو غير ناضب لا نه ومن بين نوع من النباتات المعروفة قسم صغير فقط تمت دراسته الجزاي ر با كثر من (Hostettmann et al., 1998) نوع من النباتات منها 3100 متوطنة 19,87 (Lebrun ) تعتبر من بين البلدان الا كثر تنوع ا وهذا بسبب موقعها الجغرافي و مساحتها الشاسعة وتنوع مناخها. هذا التنوع يشكل ثروة حقيقية تحتاج إلى الحفاظ عليها وإدار ا على نحو مستدام و عقلاني من أجل الحفاظ على التوازن البيي ي و الحفاظ على التنوع البيولوجي.(Pereira et al., 2003) 1

14 ا الزيت الا ساسي للنبتة المدروسة كان موضوعا للعديد من الدراسات السابقة هذه الدراسات أظهرت اختلافاتكثيرة في النتاي ج وهذا بسبب الكثير من العوامل منها: جزء النبتة الذي استخلص منه الزيت الا ساسي الموقع الجغرافي والوقت الذي جمعت فيه النبتة. تشمل المذكرة جزأين: جزء نظري وجزء عملي الجزء النظري يشمل فصلين حيث الفصل الا ول يشمل تعريفا للنباتات الطبية وكذلككيفية جمعها وحفظها بالا ضافة إلى وصف تعريف وتصنيف النبتة المختارة أما الفصل الثاني فهو يعالج الزيوت الا ساسية للنباتات الطبية أما الجزء العملي فقد خصص للدراسة النشاط البيولوجي للزيت الا ساسي للنبتة المدروسة النشاطية الضد تا كسدية والضد بكتيرية- بالا ضافة إلى دراسة تشريحية لساق وأوراق هذه النبتة باعتبارها الا جزاء الا كثر استخداما في الطب الشعبي يتضمن هذا الجزء فصلين فصل يوضح المواد والطرق المستعملة وفصل ثان يتضمن النتاي ج ومناقشتها. 2

15

16 1- ا تا

17 ااول ات ا 1- النباتات الطبية 1-1- تعريف النبات الطبي : هو النبات الذي يستخدم لمنع أو علاج أو تخفيف الا مراض المختلفة أو هو عبارة عن النبات الذي جزء منه له خصاي ص طبية.( حوالي Farnsworth et al., 1986) نوع من النباتات تستخدم في جميع أنحاء العالم لا غراض طبية و تمثل أوسع مجموعة من التنوع البيولوجي التي يستخدمها معظم الا شخاص. لا تزال النباتات الطبية تلبي الحاجة الملحة لتداوي لدى الكثير من الناس بالرغم من تطور النظام الصحي الحديث.(Elqaj et al., 2007) تستخدم النباتات الطبية في شكلين: الشكل الخام: ويكون على عدة أشكال (مثل المنقوع الزيوت العطرية ومستخلصات الا صباغ) الشكل النقي: يكون فيه العنصر النشط (المادة الفعالة) المسو ول عن الا ثر العلاجي محددا و معرفا كيمياي يا وتستخدم المركبات النقية عموم ا عندما تكون المقومات الفعالة ذات تا ثير قوي وخاص (Hamburger et Hostettmann, 1991) : المركبات الفعالة للنباتات الطبية الا ثار العلاجية لبعض النباتات معروفة جيد ا منذ القدم فالبابونج الا لمانيallemande La camomille على سبيل المثال استخدم لا لاف السنين ضد اضطرابات الجهاز الهضمي. الا لوة كانت L aloès معروفة بالفعل في وقت كليوباترا حيثكانت تستخدم لتليين الجلد. بالرغم من ذلك فا نه لم يتم عزل ودراسة المركبات- المركبات الفعالة - المتواجدة في هذه النباتات ونباتات أخرى و المسو ولة عن هذه التا ثيرات العلاجية إلا مو خر ا فمن الضروري أن نعرف تركيبة النباتات لفهم الكيفية التي تو ثر ا على 2001),.(Iserin الجسم 3

18 ااول ات ا التعرف على : 3-1- النباتات الطبية معرفة النباتات دون خطا هو شيء ضروري ومهم الحصول على دليل للنباتات البرية.(Iserin, 2001) Signatures) التواقيع" من أجل للتمييز بين الا نواع المتشا ة من النباتات تجنب التسمم كما لا يجب جمع نبتة لست لذا وجب منها متا كد ا بالنسبة إلى القدماء فقد ميزوا بين العديد من النباتات عن طريق ما يسمى ب " مذهب (doctrine des تبيان استخدامها و خصاي صها. فقد فالنباتات ظن هو لاء أن شكل أو لون نبتة ما يكفي ذات العصير الا صفر كبقلة الخطاطيف بوضوح إلى (la chélidoine) على سبيل المثال تستطيع الشفاء من أمراض الكبد والنباتات ذات العصير الا حمر كعصبة القلب le ) (millepertuis لها القدرة على الشفاء من أمراض الدم عمو ما فا ن المعلومات التي يقدمها شكل نكهة راي حة ولون النباتات هي الميزات الوحيدة التيكانت تمكننا من اختيار النبتة المطلوبة ) Bardeau,.(1973 : جمع 4- وحفظ النباتات الطبية -1 بينها جمع النباتات الطبية : الطبيعة تمثل مصدر ا غني ا للنباتات الطبية حيث تكون عملية جمعها مفيدة وممتعة على حد سواء حصاد أو جمع النباتات الطبية لا يمثل مشكلة كبيرة المهم هو معرفة النباتات المناسبة و القدرة على التمييز.(Bardeau, 1973) متى تجمع النباتات من الا فضل داي ما لجني النباتات أن يكون الجو جاف فالنباتات الرطبة بسبب المطر أو الندى تتغير تتعفن و تتخمر و تفقد أي قيمة علاجية لها لهذا يعتبر الصباح هو الوقت الا كثر ملاءمة لجمع النباتات كما يمكن فعل ذالك في المساء قبل إنخفاض درجة الحرارة (1984.(Debuigue, 2 -كيف نقوم بعملية جمع النباتات من الا فضل لجمع النباتات البرية إذاكان ذلك ممكن ا أن يكون المكان الذي تتواجد فيه النباتات المطلوبة قليل الا رتياد النباتات الموجهة للتجفيف يجب عدم غسلها (الجذور هي الا جزاء الوحيدة التي 4

19 ااول ات ا يجب غسلها وبدقة بواسطة مياه نظيفة لتخلص من أي أثر للتربة ( فينبغي إذن تجنب قطف النباتات المغبر ة المتواجدة على حواف الطرق أو تلك التي تقع على حافة الحقول المزروعة والتي يمكن أن تكون ملوثة بالا سمدة الكيماوية حديثة الا ستخدام. يجب اختيار النباتات السليمة فقط ويجب التخلص دون تردد من النباتات الذابلة ذات البقع و الا لوان الغير اعتيادية كما يجب التخلص أيض ا من النباتات التي هاجمتها الحشرات أو التي تنمو بجوار الفطريات. (Debuigue, 1984) من السهل جد ا أثناء عملية جمع النبتة المطلوبة التخلص من البقايا المختلفةكالطحالب الا وراق و الا غصان للا بقاء على النبتة التي منا فقط فالتخلص من هذه البقايا يصبح من الصعب القيام به بعد الا نتهاء من عملية الجمع كما يجب علينا التحقق بعناية من عدم خلط النبتة التي نرغب في جمعها مع نباتات أخرى ) وجود نبتة خطيرة يمكن أن يكون له عواقب وخيمة). في حالة جمع أنواع عديدة من النباتات في آن واحد ينبغي عدم خلطها مع بعضها البعض خلال عملية الجمع و أيض ا من الضروري الحرص على عدم سحق أو ضغط النباتات فتكديس النباتات بدون مبالاة قد يو دي إلى ذبولها وزوال نضار ا كما يمكن أن يو دي ذالك إلى بداية عملية التخمر في وقت مبكر ومن الا فضل استخدام سلةكبيرة خاصة لجمع النباتات حفظ و تخزين النباتات الطبية :.(Debuigue, 1984) هناك أساليب مختلفة للتخزين الا كثر شيوعا و بساطة بينها هو التجفيف بواسطة الهواء أو الفرن فالمكان الدافي والجاف يعتبر مثالي ا. بعد جفافها يمكن لنباتات أن تبقى لعدة أشهر فيكيس أو وعاء من الزجاج الملون أو فيكيس مصنوع من ورق الكرافت التجفيف:. (Iserin, 2001) التجفيف هو عملية نزع الرطوبة من المادة المراد تجفيفها يجب تطبيق هذه العملية مباشرة بعد جمع النبات. توضع النباتات موزعة في غرفة جيدة التهوية موضوعة على نسيج من الخيش أو من (jute) القطن أين يتم فصل الا نواع المختلفة عن بعضها البعض. كما يجب عدم تعريضها لا شعة الشمس المباشرة ما لم يذكر خلاف ذلك. في الواقع إن تعريضها لا شعة الشمس قد يو دي ا إلى فقد البعض من خصاي صها وذلك بسبب تطاير العديد من المواد.(Ticli, 1997) النباتات المتسخة بالتراب 5

20 ااول ات ا أو غيره من الضروري تنظيفها جيد ا و تجفيفها بعناية. و هذا ينطبق أيض ا على الجذور إذا قمنا بجمع النبتةكاملة يمكننا أن نضعها على سلك مشدود العملية تشبه إلى حدكبير ما نقوم به مع الغسيل خلال هذه العملية والتي يمكن أن تستمر لمدة تصل إلى أسبوع أو اثنين مع تقليب النباتات بشكل 2001).(Iserin, دوري الحفظ : بعد تجفيف النباتات يجب الا نتقال إلى مرحلة الحفظ مباشرة لمنع تراكم الغبار عليها لتحقيق هذه الغاية نستعمل أكياس ا من الورق علب ا مصنوعة من الصفيح (القصدير) أكياس ا من البلاستيك ) با ستثناء الا نواع التي تحتوي على الزيوت الا ساسية ( و أوعية زجاجية يجب التحقق داي م ا من عدم تكثف الماء على جدران الحاوية مما يعني مشكلة في عملية التجفيف. يمكننا إنقاذ النباتات في هذه الحالة بتجفيفها على الفور مرة أخرى هذا الكلام ينطبق أيض ا على النباتات التي تم شراؤها من المحلات المتخصصة في بيع الا عشاب الطبية (عند العشابين الصيدليات) طرق أخرى للحفظ:.(Ticli, 1997) بالا ضافة إلى لتجفيف بواسطة الهواء هناك أساليب أخرى للحفاظ على الخصاي ص الطبية للنباتات. إزالة الرطوبة :(déshumidification ) هذه طريقة فعالة لكنها باهظة الثمن فهي تتطلب استخدام جهاز خاص يسمى مزيل الرطوبة (déshumidificateur) هذا الجهاز يقوم با متصاص الرطوبة من النباتات. يجب وضع الجهاز في غرفة مغلقة حيث تعلق النباتات على شكل باقات أو توضع على أطباق مثقوبة.(Ticli, 1997) التجميد: التجميد يحفظ الا لوان و العطور ولكن هذه الطريقة مناسبة أكثر أغصان كاملة وذلك في أكياس بلاستيكية. النباتات بالنسبة للا وراق فا ا تتفتت بسرعة بعد تجميدها. من النباتات الطبية واستخدامها عند الحاجة للنباتات العطرية يمكننا تجميد من غير المفيد تذويب الجليد دون الحاجة إلى إستخدام.(Ticli, 1997 ) يمكننا أيض ا تجميد العصارات المستخلصة 6

21 ااول ات ا تحضير الا دوية العشبية : هناك العديد من الطرق لتحضير الا دوية العشبية نذكر منها النقيع (بالغلي) : Les infusions النقيع طريقة بسيطة جد ا لاستعمال ليهمد قليلا لا ن الماء الذي يغلي بقوة للا زهار و الا جزاء المورقة من النباتات. كافية لثلاث جرعات (بنيلوب أودي الا عشاب وهو يحضر تقريب اكالشاي يبدد الزيوت الطيارة المفيدة في البخار. يرفع الماء المغلي عن النار تستعمل هذه الطريقة يجب تحضير الكمية المعيارية كل يوم بيومه لتبقى طازجة وهي.(1999 : المغلي Les décoctions تقوم هذه الطريقة على استخلاص مقومات (مركبات) النبات الفعالة على نحو أقوى من النقيع وتستعمل للجذور واللحاء والغصينات وبعض أنواع الثمار العنبي ة. توضع العشبة في الماء البارد ويغلى المزيج برفق لمدة تصل إلى ساعة واحدة حتى يتبخر ثلث الساي ل. يجب تحضير الكمية المعيارية للنقيع كل يوم بيومه حتى تستعمل طازجة (المصدر السابق) الصبغة : Les teintures تحضر الصبغة عن طريق نقع العشبة ا ففة أو الطازجة في مزيج من الكحول و الماء بنسبة. 25 يمكن استعمال أي جزء من النبتة. بالا ضافة إلى استخراجها لمقومات ) مكونات ( النبتة الفعالة تعمل المادة الكحولية بمثابة حافظ مما يجعل الصبغات صالحة الا ستعمال لمدة تصل إلى سنتين. تحضر الصبغة من نوع واحد من الا عشاب وتمزج الصبغات عند الحاجة. تحضر الصبغات التجارية باستعمال الكحول ). الا ثيلي (بنيلوب أودي طرق أخذ الا دوية العشبية: الصبغة المغلي النقيع عن طريق الفم: ما تو خذ عن طريق غالب ا الشراب والا قراص الفم وأحيانا تحت اللسان ) 2006, Gurib-Fakim.( 7

22 ااول ات ا 2-6- عن طريق الا نف (بالتدخين الشم أو التبخير ( : -1 الزيوت الا ساسية المعلقة في السواي ل الساخنة أو المواد المسحوقة يمكن شمها بحيث يتم إمتصاص المركبات النشطة من خلال الغشاء المخاطي الدخان المنبعث من حرق المواد يتم استنشاقه و المركبات النشطة تمتص بواسطة الري تين بنفس الطريقة التي يمتص ا النيكوتين في الري تين (المصدر السابق) بشكل موضعي : يتم تطبيق المستحضرات والزيوت أو الكريمات التي تحتوي على المستخلصات النباتات الطبية مباشرة على الجلد حيث يتم امتصاص المركب النشط. (Gurib-Fakim, 2006 ) الاستحمام : الا عشاب أو المستخلصات العشبية يمكن أن تضاف لماء الحمام (. السابق المصدر ) الحقن تحت الجلد أو في العضلات : المكونات الكيمياي ية النقية المستمدة من أحيان ا أن بعض المركبات غير نشطة تمام ا حقنها النباتات الطبية يتم حقنها في مجرى الدم ومن المثير للاهتمام عندما تو خذ عن طريق الفم و تصبح نشطة للغاية عندما يتم. (Gurib-Fakim, 2006 ) -7-1 الا نسجة النباتية : Les tissus végétaux تنتشر المواد الفعالة في معظم أجزاء النبات ولكن تصنيعها يتم في أجزاء معينة منه ولدراسة هذه الا جزاء يجب القيام بدراسة تشريحية لهذه النباتات (حجاوي وآخرون 2004). هناك نوعين من الا نسجة في النباتات الراقية وهما: : الا نسجة الا نشاي ية Les méristèmees تتكون هذه الا نسجة من خلايا لها القدرة على الا نقسام تنقسم هذه الا نسجة من حيث النشا ة إلى أنسجة إنشاي ية ابتداي ية و أخرى ثانوية حيث نجد أن الا نسجة الا نشاي ية الابتداي ية Les méristèmes 8

23 ااول ات ا primaires تشمل الخلايا المكونة للجنين كما توجد في القمم النامية للجذور السيقان بدايات الا وراق في الكامبيوم الحزمي في السيقان الحديثة لذوات الفلقتين الا نسجة الا نشاي ية البينية الموجودة في قواعد السلاميات في سيقان بعض ذوات الفلقة الواحدة و قواعد الا وراق. أما بالنسبة للنوع الثاني من الا نسجة الا نشاي ية وهو الا نسجة الا نشاي ية الثانوية فهو عبارة عن نسيج خلوي انشاي ي ثانوي يقع بين اللحاء و الخشب أو تحت البشرة من النبات وهو الطبقة المسو ولة عن تجديد الخلايا كما يحتوي على قنوات مسو ولة عن التغذية ويكون: الكامبيوم الحزمي المتواجد بين الخشب واللحاء الكامبيوم المتواجد بين الحزم الوعاي ية الكامبيوم الفليني (حجاوي وآخرون 2004) الا نسجة المستديمة : وتنقسم الى : النسيج البرنشيمي الضام -1 هو نسيج يتكون من خلايا حية رقيقة الجدر متساوية الا قطار تتكون في معظمها من السيليلوز هذا النسيج له مهام متعددة مثل: تخزين الغذاء أو الماء التمثيل الضوي ي (جبر وآخرون 2001) الا نسجة الدعامية النسيج الكلونشيمي : يتكون من خلايا حية يتواجد في الا عضاء النامية من النباتات الخشبية وفي الا عضاء البالغة من النباتات العشبية التي لم يحدث فيها نمو ثانوي (جبر وآخرون 2001). النسيج السكليرونشيمي : يتكون من خلايا مغلظة بمادة اللجنين وهي في الغالب خلايا ميتة عند تمام تكوينها هناك نوعان من الخلايا التي تشكل هذا النسيج وهي الا لياف و الخلايا الحجرية (جبر وآخرون 2001) الا نسجة الواقية وهي أنسجة تحيط بالا عضاء النباتية وتلعب دور ا مهم ا في حمايتها من العوامل الخارجية البشرة و الفلين هما نوعين من الا نسجة التي تلعب دور الا نسجة الواقية (بوغديري 2000). 9

24 ااول ات ا الا نسجة الناقلة : اللحاء : له وظيفة أساسية وهي نقل وتوزيع المواد الغذاي ية الجاهزة أو ما يعرف بالنسغ الكامل إلى كافة أجزاء النبات برانشيم اللحاء (بوغديري 2000). الخشب : الممتصة الذاي بة يتكون اللحاء من الا نابيب الغربالية الخلايا المرافقة ألياف اللحاء و وظيفة الخشب هي نقل النسغ الناقص الذي يتكون من الماء والا ملاح المعدنية من التربة إلى كافة أجزاء النبات ويساهم أيض ا في تدعيم النبات يتكون الخشب من أوعية خشبية قصبات برانشيم الخشب و ألياف الخشب (جبر وآخرون.( الا نسجة الا فرازية في النباتات: الا فراز الداخلي : تكون على ثلاثة أنواع الا ولى تتكون نتيجة انقراض بعض الخلايا تاركة فراغ ا تتجمع فيه المواد المفرزة تسمى بالا نقراضية الثانية التجويف يكون أكثر انتظام ا حيث تتفرق الخلايا بعد ذوبان صفاي حها الوسطى و تعرف بالغدد الا نفصالية أما النوع الثالث فيسمى بالغدد البينية وهي تنشا من استطالة خلية واحدة بدرجةكبيرة. الا فراز الخارجي : الا فراز الخارجي عبارة عن الا جهزة الا فرازية المسو ولة عن انتاج مواد مثل الزيت وتجمعه في مواضع خاصة متكونة من خلية أو عدة خلايا والمنتشرة على السطح الخارجي لبشرة الا وراق و أجزاء الا زهار وبشرة السيقان (أبو زيد 2000). ونجد عدة أنواع نذكر منها : - الغدة الشفوية : وهي عبارة عن غدة بارزة فوق سطح خلايا طبقة البشرة للسطح العلوي و السفلي للورقة تتكون من رأس مستدير أو بيضاوي الشكلكبير الحجم وتحتوي على ثمانية خلايا إفرازية للزيوت الطيارة معنقة أو غير معنقة لاتصالها المباشر با حدى خلايا طبقة البشرة كما في أوراق وأجزاء الا زهار مثل : نبات الخزامى. 10

25 ااول ات ا - الشعيرات الغدية : عادة ما توجد على السطح السفلي للا وراق في تجاويف البشرة وقد يمتد تواجدها إلى أعناق الا وراق أو السيقان وكو وس الا زهار وليس على أي جزء آخر من الا زهار أو الثمار قد تكون جالسة أو ذات أعناق قصيرة ورؤوس كروية وحيدة أو رباعية أو ثمانية الخلايا (هيكل وعمر 1993). : -8-1 نبتة Artemisia campestris التسمية : الا سم العلمي : Artemisia campestris الا سم العربي : الشيح الحقلي الشعال أو التقفت الا سم الفرنسي :.Armoise champêtre الا سم الا نجليزي wormwood:. field وصف النبتة : Artemisia campestris المعروفة محلي ا في الا وراس باسم تقوفت راي حة مميزة معمرة تنمو في المناطق القاحلة وشبه القاحلة في الجزاي ر هي عشبة عطرية لها (dgouft) Baba Aissa, 1991 ; Chalchat ) ذات فروع متصلبة (خشبية) أسطوانية الشكل ارتفاعها يتراوح ما بين 30 (et al., 2003 هذه النبتة لها رويسات 80 و (capitules) صغيرة القنابات (bractées) في هذه الرويسات صفراء اللون ذات حواف محمرة حامل الزهرة 1 إلى 1.5 جد ا قطرها من (capitules) شفافة يحتوي الرويس سم ملم بيضوية أو مخروطية الشكل 8 إلى 3 من capitule (pédoncule) Artemisia campestris خضراء داكنة بدون شعيرات له شعيرات بيضاء أو بنية اللون أزهار أوراق David, Hervé., 1994 ; Ozenda, 1983 ; ).(Quezel et Santa.,

26 ااول ات ا التصنيف : هناك عدة تصنيفات لهذه النبتة وقد تم الاعتماد على تصنيف Cronquist فوفق ا ل : فا ن تصنيف Artemisia campestris (1971) Cronquist Plantae : Tracheobionta : Spermatophyta : Magnoliophyta : Magnoliopsida : Asteridae : Asterales ر : Asteraceae : Artemisia : Artemisia campestris. نع : الاستخدام التقليدي للنبتة : هذه النبتة استخدمت لفترة طويلة في الطب Artemisia campestris 2005) كما أ ا تستخدم في علاج مرض السكري يستخدم الجزء الهواي ي التقليدي لعلاج الكثير من الا مراض لعلاج اضطرابات الجهاز الهضمي والقرحة و آلام الطمث لهذه النبتة تستخدم حيث Dob et al., ).(Sefi et al., 2010) في علاج الحروق الا سهال لدغات العقارب الثعابين ولسعات الا كزيما إلتهاب المعدة والا معاء والروماتيزم كما أ ا تستخدم لعلاج التهابات المسالك البولية الحمى 12

27 ااول ات ا و السعال.(Ben Sassi et al., 2007) المحضر من سيقان وأوراق Saoudi et al ل (2010) وفق ا A. campestris النشاط البيولوجي : يقلل من اضطرابات الجهاز الهضمي. بالا ضافة إلى استخداما ا التقليدية Artemisia campestris نذكر من بينها : النشاط المضاد للا كسدة : فا ن الا ستهلاك اليومي من المغلي لديها العديد من الخصاي ص البيولوجية الجزء الهواي ي لنبتة التقوفت يظهر نشاطية مضادة للا كسدة هامة في الواقع هذه النبتة غنية بالمركبات التي لديها نشاط مضاد للا كسدة مثل : الفلافونويدات حموض الدباغ و البوليفينول Bruneton, ) في دراسة أجر ا 1999). لنبتة للمستخلص الماي ي (2000) و مساعدوها Aniya من خلال A. campestris ال اختبروا اختبار فيها DPPH النشاط المضاد للا كسدة 2,2-diphenyl-l-1-) (picrylhydrazyl من جهته الهواي ي ل وأظهرت النتاي ج أن المستخلص الماي ي لديه نشاط. مضاد للا كسدة عالي Akrout 2011) و مساعدوه ) A. campestris طرق مختلفة: طريقةDPPH درسوا النشاط المضادة للا كسدة لثلاثة مستخلصات للجزء (الزيوت الا ساسية المستخلص الماي ي والا يثانولي ( باستخدام ثلاث 50 تقنية décoloration du β-carotène وطريقة 2,2 azinobis-) ABTS (3-ethylbenzthiazoline-6- sulphonic acid للا كسدة منخفض في حين أن المستخلصين الماي ي مقارنة بما أظهرته الزيوت الا ساسية النشاط المضاد للبكتيريا: نبتة التقوفت ومساعدوه Naili و فوجدوا أن زيت الا ساسي لديه نشاط مضاد العضوي أظهرا نشاط ا مهم ا مضاد ا للا كسدة استخدمت أيض ا في علاج العديد من الالتهابات مثل التهابات المسالك البولية. (2010) قاموا باختبار النشاطية الضد بكتيرية للمستخلص الميثانولي لا وراق هذه النبتة فوجدوا أن نشاط هذا المستخلص كان أكثر فعالية ضد البكتيريا إيجابية الجرام Gram positif ( Staphylococcus aureus ) مثل Gram négatif الجرام منه ضد البكتيريا سالبة مثل Escherichia ) Ben Sassi أما.(coli (الميثانول و التقوفت ضد (2007) ومساعدوه خلات الا يثيل الا سيتون والكلوروفورم) درسوا النشاط المضاد للبكتيريا لا ربعة مستخلصات عضوية 23 مستحلصة من 14 نبتة نبتة طبية من بينها بكتيريا إيجابية وسلبية الغرام وأظهرت النتاي ج أن مستخلص الا سيتون هو الوحيد الذي 13

28 ااول ات ا نشاط ا يظهر ذلك فا ن مثبط ا ضد ثلاثة أنواع: S. epidermidis, S. saprophiticus, S. aureus. لديها أي ضا خصاي ص نبتة التقوفت مضادة للفطريات Kyeong فقد درس تا ثير المستخلص (2007) المستخلص الماي ي لديه هذه النبتة الماي ي لجذور نشاط مضاد للفطريات. mycorhize على فطريات ال sesquiterpène lactone الا كثر أهمية في جميع الارتيميسينين يسمى: أنواع Artemisia فهو يعتبر بالا ضافة إلى ومساعدوه فبينت النتاي ج أن النباتات من جنس ال Artemisia تحتوي على Artemisinin.(Donrop et Day., 2007) Plasmodium falciparum التا ثيرات وهو فعال ضد الا مراض المعدية مثل إلتهاب الكبد وهذا العنصر هو المستقلب الثانوي دواء فعال جد ا ضد الطفيلي الذي يسبب الملاريا لديه الا رتيميسينين.(Romero et al., 2005) النشاط المبيد للحشرات : أجريت دراسة حديثة أجر ا Pavela (2009) في أيض ا العديد من حيث تم اختبار المستخلص الميثانولي للجزء الهواي ي ل.A campestris لا جل إثبات تا ثير هذا المستخلص على نوع من أنواع البعوض و هي إناث بالغة لنوع Culexحيث quinquefasciatu الا مراض مثل الملاريا. أظهرت النتاي ج الخصاي ص الاليلوباتية النباتات من جنس منفر ا ضد هذه الحشرات تا ثير ا : (Propriétés allélopathiques) Artemisia ال في نفس المحيط معها وهذه الخصاي ص قطبية أخرى و مكونات النشاط 1- المخفض الناقلة للعديد من لها خصاي ص أليلوباتية فهي تثبط إنتاش ونمو بعض النباتات المتواجدة ربما بسبب وجود حمض الفينول (acide phénolique).(kyeong et al., 2007) (2010) مساعدوه و Sefi لسكر الدم : وجدوا أن المستخلص الماي ي لا وراق ال الجلوكوز في بلازما الفي ران التي يسببها مرض السكري الذي سببه أن انخفاض ووجدوا أيض ا A campestris ال يقلل من alloxane monohydrate تركيز الجلوكوز يرافقه من ناحية انخفاض في نسبة الدهون الثلاثية تركيز واللبوبروتينات triglycérides lipoprotéines المنخفضة الكثافة ) (LDL ومن ناحية أخرى زيادة في مستوى الا نسولين وهذا قد يمنع مضاعفات مرض السكري. 14

29 ااول ات ا التا ثير المضاد للسم ية : -1 تم إختبار أربع مستخلصات لا وراق ال ثناي ي كلورو ميثان A. campestris ( لا ظهار قدر ا diclorométhane الا فعى وأظهرت النتاي ج أن مستخلص الايثانول العقرب من نوع يحول دون (خلات الا يثيل على معادلة neutralisation Androctonus australis garzonii ثناي يكلورو ميثان في تثبيط سم أفعى من نوع الا يثانول الميثانول و سم العقرب و تفكك خلايا الدم الحمراء بسبب سم وقد تم الحصول على نتاي ج مشا ة لمستخلص.(Memmi et al., 2007) Macrovipera lebetina التركيب الكيمياي ي : كشفت العديد من الدراسات الكيمياي ية أن الجزء الخضري لنبتة Artemisia campestris بالمركبات الثانوية مثل البوليفينولات الدباغ والزيوت الا ساسية حسب ال chimiotype الفلافونويدات ) flavonoïdes les ( les polyphénols) غنية ) حموض.( Joa et al., 1998 ; Juteau et al., 2002) (Bruneton, 1999) الحرارة والا رتفاع عن سطح البحر كمية الا مطار عمر النبتة.(Jerkovic et al., 2003) ل Artemisia campestris حيث. المطيافية الكتلية ) MS ( GC- (2002) Juteau et al من كامارغ حددوا وعرفوا التركيب الكيمياي ي للنبتة يختلف ويختلف أيض ا حسب الظروف الجغرافية والمناخية (درجة وإتجاه الرياح ساعات سطوع الشمس...) وحسب بينت العديد من الدراسات التركيب الكيمياي ي للزيوت الا ساسيية تم تحليل الزيت الا ساسي 51 مركب من الزيوت الا ساسية ل بواسطة الدمج بين الكروماتوغرافيا الغازية و Artemisia campestris Camargue (مرسيليا فرنسا) الا كثر تواجد ا منها هي : capillène γ-terpinène.β-pinène و p-cymène methyleugenol spathulenol 1-phenyl-2,4-pentadiyne (2001) Akrout et al تمثل وجدوا أن المكونات الا كثر حضور ا في نوع من تونس : هي بينما β-pinène (% ) α-pinène (% و ) p-cymène ( % 27,9-24,2) أكثر من 45 Artemisia campestris من إجمالي الزيوت الا ساسية. فهي : مركبات الفلافونويد أما وهذه المكونات التي تم تحديدها في ال flavonol (kaempférol 7-méthyle) flavone (apéginie) Valant et al., ) dihydroflavonols (taxifoline-7-méthyle). Artemisia campestris flavanone (naringénine) 2003). الجدول- 01- يبين الفلافونويدات المعرفة في نبتة ال 15

30 ااول ات ا : مركبات الفلافونويد الري يسية الموجودة في Artemisia campestris الجدول 01 المراجع الفلافونويدات - Rauter et al., Flavanone: 5, 8, 4 -trihydroxyflavanone. - Hurabielle et al., Acétophénone: 3-acetyl-4-hydroxyacétophénone. - Ferchichi et al., Flavones: 5, 7-dihydroxy-3, 4 -dimethoxyflavone. -Valant-V et al., Flavonol: Kaempférol-7méthyl. - Hurabielle et al., Dihydroflavonol: 7-methyl aromadendrin. ( alcaloïdes) تحتوي أوراق Artemisia campestris ال قلويدات أيض ا على و مركبات الصابونين.(Naili et al., 2010) (saponines) 16

31 -2 ات ا

32 ا ا ا ت ا : 2- الزيوت الا ساسية : 1-2 -تعريف الزيوت الا ساسية مصطلح الزيوت الا ساسية أعطاه الطبيب ( HES) huiles essentielles مستمد من الا سم الذي "quinta essentia " Paracelsus يعني هذا الا سم عطر و جوهر النبات للمستخلصات النباتية السويسرية التي حصل عليها بواسطة عملية التقطير (Hart et al., 2008) على عكس ما قد يوحي المصطلح به فا ن الزيوت الا ساسية لا تحتوي على الدهون وليست " أساسية " معنى أ ا ضرورية للنمو أو الا يض فهي عبارة عن مركبات عطرية طيارة والتي لها مظهر زيتي ويتم الحصول عليها من النباتات العطرية بواسطة العديد من طرق الا ستخلاص كثافتها أقل منكثافة الماء (Burt, 2004) (Bakkali et al., 2008) وهي قابلة للذوبان في الدهون والمذيبات العضوية و تتشكل الزيوت الا ساسية فيكثير من النباتات كمنتجات أيض ثانوية. لها خصاي ص وأساليب إستخدام محددة أعطت بذلك فرع ا جديدا في التداوي بالا عشاب البروتوبلازم :la phytothérapie وهو طب الرواي ح.l aromathérapie le protoplasme.(binet et Brunel, 1968) 3000 حوالي زيت أساسي تم تحديدها منها تتواجد الزيوت الا ساسية في على شكل مستحلب وهي تميل إلى التجمع في قطرات كبيرة الحجم 300 فقط مهمة تجاري ا و هذا بفضل نشاطا ا البيولوجية كمضادات للميكروبات الفطريات و الطفيليات ولا جل راي حتها. تستخدم الزيوت الا ساسية في ا ال الصيدلاني الغذاي ي ومستحضرات التجميل... و يمكن لزيت أساسي واحد أن يكون له استخدامات متعددة 2008) al.,.(bakkali et : مكان 2-2- تواجدها في النبتة في النبتة يمكن للزيوت الا ساسية أن تخزن في مختلف الا عضاء مثل: الا زهار (origan) ( واللحاء (cannelier) الخشب santal) (bois de rose, citronnelle, eucalyptus) (acore) الريزومات (vétiver) أو في البذور ) (badiane الفواكه و تجميع الزيوت الا ساسية يرتبط عادة بوجود بنية نسيجية متخصصة الشكل.(Bruneton, 1987) (carvi) 01 يتم تصنيعها في سيتوبلازم الخلايا الا فرازية ثم تتجمع في خلايا غدية مغطاة بالكيوتكيل الا وراق الجذور تصنيع فالزيوت الا ساسية إن,cuticule 17

33 ا ا ا ت ا شكل و عدد البنيات النسيجية الا فرازية يختلف من عاي لة نباتية إلى أخرى و حتى من نوع إلى آخر يمكن لعدة في ات من الا نسجة الا فرازية التواجد في نفس النوع و.(Karray et al., 2009) الشكل النعناع : الا نماط المختلفة للبنيات المسو ولة عن 01 تشكل الزيوت الا ساسية poil sécréteur :( A) trichome glandulaire :(B) Mentha pulegium النعناع Mentha pulegium Thymus ل trichome بنيةglandulaire :( D) Lippia scaberrima ل trichome glandulaire :(C).(Karray et al., 2009 ; Combrinck et al., 2007) vulgaris 3-2 -كيمياء الزيوت الا ساسية : الزيوت الا ساسية هي خليط معقد من المركبات الكيمياي ية التي قد تحتوي على أكثر من ستين مكون مختلف من بينها مركبين أو ثلاثة تمثل المكونات الري يسية لها حيث تكون نسبتها في الخليط من هما أما المركبات الا خرى فغالب ا ما تكون على شكل آثار على سبيل المثال الcarvacrol و لزيت المكونين الري يسيين إلى thymol وlinalool Origanum compactum في زيت menthone و menthol بينما Coriandrum sativum المكونات الري يسية تحدد الخصاي ص البيولوجية للزيت الا ساسي المكونة له معظم مكونات العطرية الزيوت الا ساسية تتواجد هما: في مجموعتين المكون الري يسي هو. Mentha piperita التربينات لزيت عموم ا هذه.(Bakkali et al., 2008) les terpénoïdes phénylpropanoïdes ا موعتينيتم تصنيعهما خلال مسارين منفصلين و المركبات Amlan et Patra, ).( 2010 ; Calsamiglia et al.,

34 ا ا ا ت ا : التربينات Les terpénoïdes تم تعريفها على أ ا ا موعة الا كثر تنوع ا في المركبات الثانوية لدى النباتات وهي مشتقة من بنية خماسية الكربون المتكررة تصنف ( C 5 H 8 ) التربينات إلى وتسمى عادة الا يزوبرين الشكل 02 ووفق ا لعدد وحدات الا زوبرين (C15) sesquiterpénoïdes monoterpénoïde ( C10 ).(C20) diterpénoïdes في الغالبية العظمى الشكل الزيوت الا ساسية تشكل monoterpénoïdes و sesquiterpénoïdes.(benchaar et al., 2008 ; Calsamiglia et al., 2007) 03 unite isoprénique الشكل : وحدة الا زوبرين 02 الشكل : تصنيف التربينات وفق ا لعدد وحدات الا زوبرين الداخلة في تركيبها

35 ا ا ا ت ا : المركبات العطرية phénylpropanoïdes أقل تواجد ا في الزيوت الا ساسية مقارنة بالتربينات.ومع ذلك فا ن بعض النباتات لديها نسبكبيرة phénylpropanoïdes منها. مشتقة عادة من الحمض الا ميني الفينيل ألانين. phénylalanine فهي تتكون من سلسلة كربونية مرتبطة بحلقة عطرية سداسية الكربون الشكل - المركبات الداخلة في تكوين الزيوت الا ساسية -04.(Sangwan et al., 2001) يوضح بنية بعض Calsamiglia ) الشكل : بنية بعض مركبات الداخلة في تركيب الزيوت الا ساسية phénylpropanoïdes :( C) sesquiterpénoïdes :( B) monoterpénoïdes :(A).(et al., الخصاي ص الفيزياي ية والكيمياي ية للزيوت الا ساسية : 04 الزيوت الا ساسية ساي لة في درجة حرارة الغرفة و تتميز بكو ا طي ارة وهذا ما يميزها عن الزيوت الثابتة.(Guignard et Cosson, 1985) نادر ا ما تكون الزيوت الا ساسية ملونة و كثافتها عموم ا أقل من 20

36 ا ا ا ت ا. ( cannelle كثافة الماء و (الزيوت الا ساسية ل girofle تشكل إستثناءات لديها الزيوت الا ساسية معامل إنكسار عالي وهي قادرة على تحريف وتشتيت الضوء المستقطب القابلية للذوبان في المذيبات العضوية: الزيوت الا ساسية قابلة للذوبان في المذيبات العضوية فهي تذوب في الدهون Liposolubles.(Bruneton, 1993 ; Guignard. et Cosson, 1985) Entraînables à la vapeur d'eau راي حة مميزة مشكلة ما يسمى بالماء العطري وهي أيض ا قابلة لسحب بواسطة بخار الماء و ذوبا ا ضعيف جد ا في الماء ومع ذلك فهي تعطي لهذا الماء.(Bruneton, 1993) eau aromatique : إستخدامات 5-2- الزيوت الا ساسية هذه المنتجات الطبيعية ذات أهميةكبيرة لكثير من القطاعات مثل: الصيدلة: يمكن استخدامها على النحو التالي: تنكيه الا دوية التي تو خذ عن طريق الفم لا جل تاثيرا ا الفيزيولوجية في الصناعة : صناعة العطور و التجميل:.(Ziming et al., 2005).(Paris et Hurabielle,1981) ( Verveine, Menthes) Rose: الزيوت طبيعي وبعض أصلها العديد من العطور الا ساسية تشكل أساس العديد منها الورد...الخ,1981) Hurabielle.(Paris et Ylang-ylang Vétiver الياسمين Jasmine التغذية : تستخدم الزيوت الا ساسية مثل (زيت الليمون النعناع والقرنفل ( بكثرة في إعطاء نكهة للا طعمة.(Ziming et al., 2005 ; Paris et Hurabielle,1981) ( jus de fruits pâtisserie ) 21

37 ا ا ا ت ا : النشاط البيولوجي الا ساسية للزيوت -6-2 للزيوت الا ساسية خاصية علاجية وتطهيرية مهمة ففي القرون الا خيرة أجريت العديد من الدراسات العلمية التي إهتمت ذه الخصاي ص (2008 (Kaloustian, وقد تم التوصل إلى العديد من النتاي ج الهامة مثلا :النباتات تحتوي Eucalyptu Lavande Girofle Thym Cannelle Sarriette في زيو ا الا ساسية على المركبات: linalol citral géraniol thymol التي تملك خاصية ضد تعفنية مضاعفة ب أشار سنة مرة على التوالي من الفينول.(Bruneton, 1999) phénol (2004) Lamendin et al., أن مغلي البابونج Camomille الا ساسي له كمضاد للا لتهاب وكمسكن ومهدئ للجهاز العصبي كما استعمل استعمل كمهدئ واستخدم الزيت Clou de girofle في فرنسا 1623 Pensée ضد تصلب الشرايين في طب الا سنان كمطهر ومسكن للا لم استعمل الثوم وبنفسج الثالوث البري (Rubin, 2004) الزيوت الا ساسية خاصية ضد تا كسدية مثل نباتات جنس هذا وقد أكدت العديد من الدراسات أن للكثير من.(Delfine et al., 2005) Menthe معظم الزيوت الا ساسية التي تحتوي على التربينات لها قدرة كبيرة ضد ميكروبية كما أ ا مسكنة للا لم منشطة للقلب ومساعدة على الهضم ري وي والزيت كمطهر الا ساسي للكالبتوس للا ستعمال الخارجي...(2004 Rubin, والطفيليات (حجاوي و آخرون كما يستعمل الزيت الا ساسي الا ساسي للقرنفل ل ) كما أن الزيت الا ساسي للقرفة كمنشط عام والزيت كمساعد على الهضم وكمطهر Ascardiol.( النشاطية ضد بكتيرية : Origan d Espagne vilgaris نشاطية ضد بكتيرية كبيرة ومهمة طارد للديدان أظهرت الكثير من الدراسات أن كل من النباتات : Thymus Eugenia caryophyllata Cinnamomum zeylanicum الهضمي مثل Salmonella enterica وcoli Escherichia أجرى طريقة خاصة ضد البكتيريا المسببة لا مراض الجهاز التنفسي وأمراض.(Kaloustian, 2008) (2006) Erturk التخفيف 11 دراسة لمعرفة نشاطية وعلى فطرين باستعمال طريقة أقراص الا نتشار على الا غار لها الجهاز زيت أساسي على خمسة سلالات بكتيرية باستعمال لكنها أكدت أن الزيوت الا ساسية لها تا ثير على نوع واحد على الا قل من البكتيريا وقد أعطت نتاي ج مختلفة Koné et كما قام 22

38 ا ا ا ت ا (2004) al بدراسة الزيوت الا ساسية ل 50 6 نبتة طبية وتا ثيرها على microdilution en milieu liquide طرقتي : 31 إيجابية حيث وجد سلالات من البكتيريا با ستعمال والا نتشار على وسط صلب بالا قراص وقدكانت النتاي ج مستخلص زيتي كان له تاثير ضد بكتيري على البكتيريا الموجبة الغرام. : النشاطية ضد فطرية Activité Antifongique 2006) حسب ) Mohammedi carvacrol و thymol فا ن المركبان : فطرية من جهة أخرى الزيت الا ساسي للنوع Mentha pulegium يملكان نشاطية ضد بكتيرية و (+)R الذي يحتوي على % 82 بنسبة pulégone يملك نشاطية كبيرة ضد الفطرين Pénicilium وMucor. : النشاطية ضد حشرية Activité contre les insects ذكر حجاوي وآخرون Citronellol (2004) أن زيت طارد للحشرات كالبعوض. في حين أكد Benayad et al ضد الحشرات ساعة. (2007) في دراسته للزيت الا ساسي ل Mentha pulegium أن لهذا الا خير نشاطية dominica ( Rhyzopertha التي أبيدت بالكامل خلال 24 Sitophilus oryzae) 7-2- آلية عمل الزيوت الا ساسية : العديد من النظريات وضعت لتفسير الا لية التي تعمل ا الزيوت الا ساسيةكمضادات ميكروبية. التكوين المعقد للزيوت الا ساسية يميل إلى إثبات أن هذا النشاط يرجع إلى عدة آليات مختلفة تتعلق بطبيعة هذه المركبات الكيمياي ية (Burt, 2004; Carson et al., 2002; Skandamis et al., 2001 ) وتعزى معظم هذه الا ليات إلى تفاعل مكونات الزيوت الا ساسية مع غشاء الخلية Benchaar et al., ).(2008 الزيوت الا ساسية تتكون من جزيي ات قابلة لذوبان في الدهون لذلك فهي قادرة على اختراق الغشاء الخلوي المتكون من طبقة مزدوجة من الفوسفولبيدات تراكم هذه الجزيي ات بين الفوسفولبيدات يو دي إلى تغير متعلق بتكوين غشاء الخلية وإلى خلل وتعطيل لا ليات نقل المواد المغذية بواسطة الغشاء الخلوي.(Sikkema et al., 1994; Ultee et al., 1999) 23

39 ا ا ا ت ا كما يمكن أيض ا للزيوت الا ساسية تشويش التدرج الا يوني على جانبي الغشاء السيتوبلازمي مما يقلل من إستقراره و تعطيل النقل الغشاي ي ومع ذلك فبعض البكتيريا قادرة على مواجهة هذا التا ثير باستخدام مضخة الا يونات مع تباطو في سرعة نموها بسبب استنزاف طاقتها في هذه المضخة Cox ). (et al., 2001 ; Griffin et al., 1999 ; Ultee et al., 1999 آلية أخرى مقترحة لتفسير تا ثير هذه الزيوت الا ساسية تركز على مجموعة الهيدروكسيل المتواجدة في الفينولات مثل carvacrol التي من شا ا أن تصبح بمثابة ناقل للكاتيونات والبروتونات الا حادية التكافو عبر الغشاء وهذا التا ثير يشوش التدرج الا يوني لا غشية الخلايا الجرثومية وبالتالي وظيفتها.(Ultee et al., 2002) مثل الزيوت الا ساسية المستخلصة من القرفة و الثوم يمكن أن تثبط النشاط الا نزيمي ل bactéries du rumen. Enterobacter aerogenes الا حماض النووية.(Calsamiglia et al., 2007) زيوت أساسية أخرى تمنع نمو الميكروبات عن طريق التا ثير على تا ثير الزيوت الا ساسية يعتمد أيض ا على طبيعة الكاي نات الدقيقة المستهدفة. البكتيريا الا يجابية الغرام هي الا كثر حساسية لتا ثير الزيوت الا ساسية مقارنة بالبكتيريا سالبة الجرام.هذا يمكن تفسيره بوجود الغشاء الخارجي في البكتيريا سالبة الجرام الذي يعمل كحاجز قادر على خفض نفاذية المركبات الكارهة للماء (2007 al., (Calsamiglia et ومع ذلك يمكن للجزيي ات منخفضة الوزن الجزيي ي مثل carvacrol و thymol عبور هذا الحاجز.(Dorman et Deans, 2000 ; Ultee et al., 2002) 8-2- سمية الزيوت الا ساسية: هذا الجانب من المعرفة له أهميةكبيرة. فالسمية المزمنة toxicité chronique للزيوت الا ساسية ليست معروفة جيد ا كما نفتقر للبيانات المتعلقة باحتمالية وجود خصاي ص لهذه الزيوت تسبب الطفرات أو تسبب السرطان cancérogènes ولكن خطر السمية الحادtoxicité propriétés mutagènes aigue معروف جيد ا و خاصة عند ابتلاعكمياتكبيرة من الزيوت الا ساسية التي تتسبب مث لا في تسمم الا عصاب la neurotoxicité و هذا لا حتوي ها على tanaisie absinthe thuya) thuyone أو ( officinale sauge : هذه الكيتونات تسبب أزمات تشبه الصرع (hysope) pinocomphone épileptiformes و tétaniformes تسبب إضطرابات نفسية و حسية و التي تتطلب العلاج 24

40 ا ا ا ت ا بالمستشفيات. وهناك تربينات أحادية مثل monoterpène menthol camphre: (خطر تشنج في لسان المزمار هي الا خرى سامة عند ابتلاعها بجرعات عالية glotte عند الا طفال الصغار) cineole.e-anéthole هذه السمية التي لايمكن تجاهلها تجعلنا نتخذ موقف ا حذر ا عند استخدامنا للزيوت الا ساسية وخاصة في تناولها عن طريق الفم و في صفتها النقية وبتراكيز عالية.(Bruneton, 1993) 9-2- طرق إستخلاص الزيوت الا ساسية : يتم استخلاص الزيوت الا ساسية بواسطة العديد من الطرق نذكر أهمها: التقطير الماي ي التقطير ببخار الماء الا ستخلاص بالضغط البارد الا ستخلاص بواسطة المذيبات العضوية التقطير الماي ي : hydrodistillation التقطير الماي ي hydrodistillation هي طريقة مضبوطة لاستخلاص AFNOR من قبل normée الزيوت الا ساسية وكذلك لمراقبة الجودة (1996, (Maisonneuve حيث يتم غمس المادة النباتية المراد استخلاص الزيت الا ساسي لها في الماء الحرارة المرتفعة تسمح بانفجار الخلايا النباتية وتحرير مع بخار الماء خليط ا ازوتروبي ا هو ثم يتم اخضاع الكل للحرارة.mélange azéotropique الجزيي ات العطرية التقطير حتى الغليان (الشكل- 05-). هذه الجزيي ات العطرية تشكل الماي ي يمكن أن يكون مع أو بدون إعادة تدوير للماء ويسمى مبدأ إعادة التدوير عادة ب.cohobage في المختبر النظام المزود ب و الذي يستخدم عادة لاستخراج الزيوت الا ساسية والمتوافق مع التقطير الماي ي مدة الكليفنجرClevenger cohobe la Pharmacopée Européenne hydrodistillation يمكن أن تتغير بشكل كبير حيث قد تبلغ عدة ساعات وهذا يعتمد على المعدات المستخدمة و المواد النباتية المراد علاجها مدة لا تو ثر فقط على المردودية ولكن أيض ا على تركيبة المستخلص. التقطير 25

41 ا ا ا ت ا (Bourrel, 1993) المستخدم : جهاز Clevenger الشكل 05 في عملية التقطير الماي ي العوامل التي تو ثر على جودة الزيوت الا ساسية : العوامل التي تتحكم في نوعية الزيوت الا ساسية يمكن أن يكون مصدرين : لها المصدر التكنولوجي المصدر الطبيعي يمكن أن تحدث تغيرات كبيرة في الزيت الا ساسي من بداية جمع النباتات إلى غاية استخلاصها.(Garnero, 1985) فطريقة الحصاد وظروف النقل التخزين و التجفيف يمكن أن تولد des dégradations enzymatiques ) تحدث التغييرات الا كثر أهمية خلال عملية التقطير الماي ي تحت تا ثير ظروف العمل خاصة المتعلقة بالوسط (درجة الحموضة درجة الحرارة) والوقت اللازم لعملية الا ستخلاص. تتدخل عوامل أخرى أيض ا مثل تلك الا جراءات التي يمكن القيام ا قبل أو أثناء عملية التقطير الماي ي كالطحن pression dégradation chimique ou enzymatique dilacération broyage ( agitation تساهم في اختلاف مردود وجودة الزيت الا ساسي التقطير الوسط الماي ي الناتج عن غمس النبتة تصل درجة الحموضة فيه ما بين 1992) Peyron,.(Richard et خلال 7 و 4 4 بسبب بعض الفواكه (Koedam, 1987) وأحيان ا أقل من مكونات هذا الوسط تتعرض للحرارة و للوسط الحمضي 26

42 ا ا مما قد يو دي إلى تغييرات كيمياي ية. الزيوت الا ساسية المستخلصة ا ت ا تختلف كثيرا عن جوهر الا صلي Morin ) خصوص ا أذا كانت مدة الغليان طويلة و درجة الحموضة منخفضة l essence originelle.(et Richard, 1985 المادة النباتية تخضع لتفاعلات كيمياي ية مختلفة : hydratations déprotonations hydrolyses و (Morin et Richard, 1985) cyclisations يمكن أن تحفزها معادن موجودة بكميات ضي يلة في النباتات( 1987 ( Koedam أو آتية من معدات الجمع و الا ستخلاص مما يتسبب بتحولاتكيمياي ية للمكونات إماهة الا حماض العضوية (l'hydrolyse) acides organiques الا سترات غالب ا ما يكون أول تفاعل يحدث فيو دي ذلك إلى تكوين والتي بدورها و تحفز تفاعلاتcyclisation déshydratation.(teisseire, 1987) للحد من هذه المشاكل مدة التقطير الماي ي و Morin ( دعا إلى الحفاظ على ph معتدل و تقليل 1985 ) Richard hydrodistillation على تشكيل الحموضية. قد تكون العوامل الطبيعية متعلقة بداخل النبتة على الرغم من أنه من المعروف أن تفكك المواد النباتية يحث intrinsèques extrinsèques تتعلق بالشروط التي تنمو وتطور فيها النباتات مثل التركيب الجيني للنباتات أو خارجية.(Morin et Richard, 1985) مردود و تركيب الزيوت الا ساسية يختلفان تبع ا للبيي ة (درجة الحرارة الملوحة و هطول الا مطار... ( وفترة الحصاد ) الموسم مرحلة النمو) و حالة النبتة (طازجةأو مجففة) و تقنية الا ستخلاص المستعملة (... extraction par solvant entrainement à la vapeur d eau hydrodistillation) وتلاحظ أيض ا الا ختلافات بين الزيوت الا ساسية المستخلصة من أجزاء مختلفة لنفس النبات ) الا وراق الا زهار السيقان البذور والجذور ( الا ساسية المستخلصة من أوراق الكزبرة المستخلصة من بذور النبتة نفسها مثلا الزيوت (Dorman et Deans, 2000 ; Dudareva et al., 2004) coriandr. (Delaquis et al., 2002) sativum) (Coriandrum تختلف عن الزيوت النباتية 27

43

44 3 -ااد واق ا

45 ا ا ااد واق ا 3- المواد والطرق المستخدمة : المادة النباتية : - تم الحصول على العينة النباتية لل (الجزء الهواي ي) في مرحلة الا زهار الشكل Artemisia campestris 06- في شهر نوفمبر 2013 (2013/11/2) من منطقة آريس الواقعة في الجنوب الشرقي لولاية باتنة تم تجفيف الجزء الهواي ي للنبتة في الظل لمدة أسبوع قبل الا ستعمال قسم البيولوجيا والبيي ة النباتية بجامعة سطيف وتم حفظ عينة مرجعية في المخبر. وقد تم التعرف على العينة النباتية في أ ): ب ): الشكل- 06-: صور فوتوغرافية لنبتة campestris Artemisia النبتة أ ): في بيي تها الطبيعية. ب ): صورة تبين الشكل الخارجي للنبتة أوساط الزرع : وسط.MH -Meuller Hinton المرق المغذي.le bouillon nutritif 28

46 ا ا ااد واق ا تم الحصول عليها من معهد باستور بالجزاي ر العاصمة استعملت. Erythromycine: (E) Chloramphénicol (C) المضادات الحيوية : كشاهد ايجابي وهي : (GM) Gentamicine. Penicilline:( P) Oxacilline:(OX) السلالات : البكتيرية استعملت أربع سلالات بكتيرية مرجعية (ATCC) American Type Culture Collection وهي: Bacillus subtilis ATCC Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC المذيبات : سلفوكسيد (DMSO) Dimethyl sulfoxide. Tween 80 الديميثيل التوين الميثانول. الملونات : -6-3 أخضر اليود Vert d iode الكارمن الشبي.Carmin aluné المواد الكيمياي ية : (2,2 -diphényle-1-picryl hydrazyl) DPPH على شكل مسحوق. BHT على شكل مسحوق. محلول حمضالخل. ماء جافيل. 29

47 ا ا ااد واق ا الا جهزة : جهازكليفنجر. مجهر ضوي ي. جهاز spectrophotometer طريقة العمل : تحضير المقاطع النباتية للدراسة التشريحية : تم إجراء المقاطع على أجزاء نباتية فتية تشمل: الساق والا وراق للنبتة.A campestris وذلك بواسطة ميكروتوم يدوي حسب المراحل التالية استخدام البيلسان (bois du sureau) لانجاز مقاطع دقيقة وذلك بوضع الورقة بين شطري لب البيلسان وفي حالة الساق وضعها في ثقب ننجزه في لب البيلسان. انجاز العديد من المقاطع لكل من الساق والورقة وضع المقاطع في مصفاة خاصة والتي بدورها نكون موضوعة في حوض به ماء مقطر لتجنب جفاف المقاطع وذلك لحين استخدامها. تلوين المقاطع باستخدام طريقة التلوين المضاعف (بوغديري 2000) وفق المراحل التالية وضع المقاطع في ماء جافيل لمدة 20 دقيقة. 02 تغسل بعد ذلك جيدا بواسطة الماء المقطر. وضع المقاطع في حمض الخل المخفف (%10 ( مدة 02 الغسل الجيد بالماء المقطر. توضع المقاطع في أخضر اليود من 03 دقيقة إلى الغسل الجيد بالماء المقطر. توضع المقاطع في الكارمن الشبي مدة الغسل الجيد بالماء المقطر. دقيقة دقيقة. دقاي ق

48 ا ا ااد واق ا استخلاص الزيت الا ساسي للنبتة : تم استخلاص الزيت الا ساسي باستخدام جهاز التقطير الماي ي الذي يدعى كليفنجر حيث يعتمد الشكل تقطيع النبتة إلى قطع صغيرة (Clevenger) التقطير الماي ي على قدرة بخار الماء حمل الزيت الاساسي للنبات توضع هذه الا خيرة في دورق زجاجي (سعته ثلثين من حجم الدورق على الا كثر لتجنب فوران الخليط. تحت تا ثير منبع 05 فبعد لتر) به ماء مقطر- يملا حراري يغلي الماء المقطر ويتبخر حاملا معه الزيت الا ساسي فينتقل عبر أنبوبة تمر عبر جهاز تبريد الذي يتسبب في تكثيف بخار الماء المشبع بالزيت فتتكون قطيرات صغيرة وتتراكم با نبوبة ا ماء مقطر وبسبب الفرق الموجود بين كثافة الماء المقطر والزيت الا ساسي يبقى الزيت طافيا فوق سطح الماء المقطر عملية التقطير تستغرق مدة 03 ساعات بعد غليان الماء المقطر. يجمع الزيت الا ساسي في قارورة معتمة زجاجية يتم التخلص من كمية الماء التي من الممكن ان تتبقى أسفل القارورة بواسطة سولفات الصوديوم تحفظ القارورة بعيدا عن الضوء وفي درجة حرارة تتراوح ما بين م. الشكل -07- : جهاز الكليفجر المستخدم لاستخلاص الزيت الا ساسي للنبتة ال. A.campestris حساب مردود الزيت الا ساسي : مردود الزيت الا ساسي هو النسبة بين كتلة الزيت الا ساسي المستخلصة وكتلة النبتة قبل الا ستخلاص.(Carré, 1953) 31

49 ا ا يحسب مردود الزيت المستخلص حسب العلاقة التالية: ااد واق ا م = ك ا/ ك ا 100 x م: مردود الزيت الا ساسي المستخلص %. ك الزيت :كتلة الزيت الا ساسي المستخلصة بالغرام. ك النبتة :كتلة النبة قبل الا ستخلاص بالغرام اختبار النشاطية الضد بكتيرية للمستخلص الزيتي : - طريقة التماس المباشر والا نتشار على وسط صلب بالا قراص: حسب (1979) يتم تقييم نشاطية اي مادة كيمياي ية أو طبيعية على الا حياء الدقيقة - نوعية وكمية- اقتصرنا نحن على الدراسة النوعية فقط Belaiche بنوعين من الدراسة الدراسة النوعية : تتمثل في اختبار حساسية الكاي ن الدقيق للمادة المضادة له لهاذا الغرض تستعمل العديد من الطرق والتقنيات أهمها تلك التي تعتمد على انتشار المادة المختبرة داخل وسط الزرع الصلب والطريقة المستعملة بشكل واسع هي طريقة الا قراص. A.campestris لاختبار النشاطية ضد البكتيرية للزيت الا ساسي ل تم اتباع طريقة التماس المباشر والانتشار بالا قراص المقترحة من طرف : (NCCLS) National Committee for Clinical Laboratory Standards المضادات الحيوية (antibiogrammes) (Rahal, 2005) (aromatogrammes) والخاصة باختبار مع استبدال المضادات الحيوية بالزيوت الا ساسية. يمكن تلخيص هذه الطريقة في الشكل- :-08 32

50 ا ا ااد واق ا ا ا اة %&' #$ "ي ء +, ) رة ا$# ($) Farland 0.5 Mc '3$ أط ق أو/ ط ارع ';: ا 94 اص " 6$7 وو, 5 ($) ا 4 ط ق ا&%= >ة 24-18/ ( در <ارة 37 م 0 9 س أD9 ر ا C + و' 7B ا A@ A.campestris -08-: الشكل خطوات دراسة النشاطية التثبيطية للمستخلص الزيتي للنبتة السلالات البكتيرية بطريقة الانتشار المباشر بالا قراص. على لاجراء هذا الاختبار يستعمل وسط الزرع Mueller Hinton مع جميع الا نواع البكتيرية المختبرة.(Rahal, 2005) يصب الوسط في أطباق بتري ذات قطر 4 سم بسمك 9 مم (بمعدل 20 مل فيكل طبق بيتري) ثم تترك حتى تتصلب ليتم الزرع عليها. بعدها يتم تحضير اللقاح أو المعلق البكتيري المتجانس انطلاقا من مزرعة بكتيرية حديثة عمرها بين ساعة في ماء فيزيولوجي معقم ثم ضبط العكارة على 0.5 ) مايقارب 10 8 Mc Farland للمعلق في طول الموجة 625 وحدات مشكلة للمستعمرات CFU /مل) أو بقياس الكثافة الضوي ية نانومتر وضبطها بين 0.1 و دقيقة الا ولى من تحضيره لتفادي زيادة نمو البكتيريا. يجب أن يستعمل هذا اللقاح خلال 33

51 ا ا ااد واق ا يغمس ماسح قطني معقم في المعلق البكتيري ثم يمسح به على كامل الوسط الجاف بشكل خطوط متلاصقة مع تكرير العملية ثلاث مرات وذلك بتدوير الطبق المعقمة ذات القطر ميليمتر ب 6 الزيت الا ساسي المخفف في DMSO الى تركيزات مختلفة ) % على التوالي ثم توضع فوق الا وساط المزروعة. في كل مرة. يتم تشبيع الا قراص ميكرولتر من المستخلص الزيتي النباتي الخام ثم المزيج المتكون من 5/1 2/1 ح/ح) اي ما يعادل 50 %20 نحضر طبق بيتري إضافي به أقراص مشبعة ب 10 ميكرولتر من مادة DMSO وقرص آخر فارغ كشاهد على الا ختبار السلبي كما أجريت الدراسة على أقراص للمضادات الحيوية للمقارنةكشاهد إيجابي وقد تم اختيار المضادات الحيوية حسب توصيات قطر التثبيط أقل أو يساوي Rahal 08 تكون متوسطة عند قطر تثبيط يتراوح بين التثبيط أكبر من ( 2005 ).تعتبر حساسية سلالة ما منعدمة أذا كان ملم وتكون محدودة عندما يتراوح قطر التثبيط بين 14/08 20/14 ملم. 20 (Duraffourd et al., 1990) اختبار النشاطية الضد تا كسدية للزيت الا ساسي : نشاطية الزيت الا ساسي ضد التا كسدية حددت باتباع طريقة يستعمل جذر ال ملم بينما ملم لكنها تكون جد حساسة عندما يكون قطر Que S. (C 18 H 12 N 5 O 6 ) DPPH من الميثانول. حيث يستخدم ال والاصطناعية. يتم تحضير محلول ال DPPH ومساعدوه (2006) حيث 100 مغ في 4 با ذابة : DPPH مبدأ عمل اختبار مل عادة لتقييم النشاطية الضد التا كسدية للمركبات الطبيعية ال DPPH يعتمد مبدأ عمل هذه الطريقة على مضادات الا كسدة التي تلعب دور في الا يقاع بالجذور الحرة في حالة وجود مثل هذه المضادات للا كسدة سواء اصطناعية مثل الا ساسية فا ن ال الى BHT 2,2 diphényl 1 picryl hydrazyl DPPH 2,2diphényl 1 picryl hydrazine ذو اللون الا صفر أو طبيعية مثل الزيوت الذي يتميز بلونه البنفسجي يرجع.(Maataoui et al., 2006) 09-. الشكل- 34

52 ا ا ااد واق ا.(Molyneux,2004) الشكل- 09 -:الشكل الحر والمرجع ل DPPH طريقة العمل : تم وضع أحجام مختلفة من الزيت الا ساسي للنبتة ( 02 ميكرولتر Artemisia campestris L 10 ميكرولتر 08 ميكرولتر 06 ميكرولتر 04 في أنابيب اختبار ميكرولتر) في كل أنبوب اختبار من الا نابيب السابقة تم اضافة الميثانول لتخفيف وإذابة الزيت الا ساسي حيث في كل أنبوب اختبار يكون الحجم النهاي ي (ميثانول + الزيت ( يساوي 600 مكرولتر (اي أضفنا 596 ميكرولتر نضيف 590 ميكرولتر 600 ميكرولتر ميكرولتر من الميثانول لكل أنبوب على التوالي). بعد الا نتهاء من اضافة الميثانول ميكرولتر من محلول ال في الظلام وفي درجة حرارة الغرفة لمدة تم تحضير الشاهد السلبي باضافة الا يجابي هو محلول ال العلاقة التالية DPPH 30 لكل أنبوب اختبار وبعد عملية الرج تم وضع الا نابيب دقيقة قياس الكثافة الضوي ية تم في طول الموجة الى DPPH ميكرولتر من 600 BHT : A% نسبة النشاطية المزيحة للجذور : Abs control نانومتر ميكرولتر من الميثانول.الشاهد النشاطية المزيحة للجذور يعبر عنها على شكل نسبة مي وية وتحسب حسب A%= Abs control Abs échantillon / Abs control x 100 Abs échantillon الكثافة الضوي ية للشاهد السلبي. : الكثافة الضوي ية للعينة. IC 50 تعرف على أ ا تركيز العينة الذي يرجع %50 من الجذور الحرة ل.DPPH 35

53 4 -ا وا

54 ا اا ا وا 4- النتاي ج والمناقشة: -1-4 الدراسة التشريحية : الدراسة التشريحية للساق : من خلال المقاطع العرضية التي أنجزت للسيقان الفتية للنبتة Artemisia campestris لاحظنا تكون البنية الا ولية التي تتا لف من أربع مناطق نسيجية متباينة في اللون وشكل الخلايا تتمثل في البشرة القشرة الحزم الوعاي ية واللب. سيقان نبتة أ Artemisia campestris التي انجزت عليها وبمرور الوقت تصبح داي رية الشكل. لها شكل خماسي في بداية نموها وهذا ماتظهره المقاطع العرضية ب 10: الشكل مقطعين عرضيين في ساق فتية للنبتة Artemisia campestris في بداية نمو الساق (أ) ثم بمرور الوقت تصبح داي رية الشكل (ب) (تكبير 100 يظهر الشكل الخماسي مرة) البشرة 4 : تتكون من صفين إلى ثلاثة صفوف من الخلايا المتلاصقة ببعضها البعض. البشرة الشكل 36 :11 مقطع عرضي في ساق نبتة Artemisia campestris يظهر يظهر البشرة تتكون من ثلاثة صفوف من الخلايا المتلاصقة (تكبير مرة). 400

55 ا اا ا وا القشرة 4 : نسيج برانشيمي تتكون من خلايا برانشيمية صغيرة وأخرى كبيرة الحجم متواجدة بين البشرة والحزم الوعاي ية. القشرة 12: الشكل مقطع عرضي في ساق نبتة Artemisia campestris يظهر القشرة (تكبير مرة) الحزم الوعاي ية : تحاط بالمحيط الداي ر حيث يلاحظ أن عدد الحزم الوعاي ية عشرة حزم وعاي ية وتكون هذه الحزم في البداية منفصلة عن بعضها البعض ثم تعود بمرور الوقت لتقترب من بعضها تتكون كل حزمة من خشب في جهة الداخل يقابله اللحاء نحو الخارج وبينهما يوجد Procambium توزع هذه الحزم يتبع شكل الساق ففي البداية يكون توزعها على شكل خماسي ثم يصبح توزعها داي ري. 13: الشكل توزع الحزم الوعاي ية في ساق نبتة Artemisia campestris مرة) 100 (تكبير 37

56 ا ا ا ا وا اﻟﻠﺐ : ﻳﺘﻜﻮن ﻣﻦ ﻧﺴﻴﺞ ﺑﺮاﻧﺸﻴﻤﻲ ذو ﺧﻼﻳﺎ ﻣﻀﻠﻌﺔ وﻛﺒﲑة اﳊﺠﻢ ﳛﺘﻞ ﺟﺰء ﻣﺘﻮﺳﻂ ﻣﻦ ﻣﺴﺎﺣﺔ اﳌﻘﻄﻊ. اﻟﻠﺐ اﻟﺸﻜﻞ :14 ﻣﻘﻄﻊ ﻋﺮﺿﻲ ﰲ ﺳﺎق ﻧﺒﺘﺔ campestris Artemisia ﻳﻈﻬﺮ اﻟﻠﺐ )ﺗﻜﺒﲑ 100 ﻣﺮة( اﻟﺪراﺳﺔ اﻟﺘﺸﺮﻳﺤﻴﺔ ﻟﻠﻮرﻗﺔ : ﻣﻦ ﺧﻼل ﻣﻼﺣﻈﺔ اﳌﻘﺎﻃﻊ اﻟﻌﺮﺿﻴﺔ ﻟﻸوراق ﰎ ﻣﻼﺣﻈﺔ ﻣﺎﻳﻠﻲ : اﻟﺒﺸﺮة ﺻﻔﲔ ﻣﻦ اﳋﻼﻳﺎ ﺗﻐﻠﻒ ﺑﻄﺒﻘﺔ رﻗﻴﻘﺔ ﻣﻦ اﻟﻜﻴﻮﺗﻴﻜﻞ ﲢﺘﻮي ﻋﻠﻰ ﺛﻐﻮر ﺗﺰداد ﻛﺜﺎﻓﺘﻬﺎ ﺧﺎﺻﺔ ﰲ اﳉﻬﺔ اﻟﺴﻔﻠﻴﺔ اﳌﻘﻄﻊ اﻟﻌﺮﺿﻲ ﻟﻠﻮرﻗﺔ ﻳﻈﻬﺮ وﺟﻮد ﻋﺮق رﺋﻴﺴﻲ وﲬﺴﺔ ﻋﺮوق ﺛﺎﻧﻮﻳﺔ ﰲ ﻫﺬﻩ اﻟﻌﺮوق ﺗﻮﺟﺪ اﳊﺰم اﻟﻮﻋﺎﺋﻴﺔ اﳌﺘﻜﻮﻧﺔ ﻣﻦ اﳋﺸﺐ واﻟﻠﺤﺎء ﳛﻴﻂ ﺬﻩ اﳊﺰم اﻟﻮﻋﺎﺋﻴﺔ ﻧﺴﻴﺞ ﺑﺮاﻧﺸﻴﻤﻲ ﻋﺎدي ﻳﻠﻴﻪ اﻟﻨﺴﻴﺞ اﻟﻌﻤﺎدي ذو اﳋﻼﻳﺎ اﳌﺘﻄﺎوﻟﺔ واﳌﱰاﺻﺔ. أ ه ج د اﻟﺸﻜﻞ :15 ﻣﻘﻄﻊ ﻋﺮﺿﻲ ﰲ ورﻗﺔ ﻧﺒﺘﺔ campestris Artemisia ﻳﻈﻬﺮ أ( ﺑﺸﺮة ب( ﻧﺴﻴﺞ ﻋﻤﺎدي ج( ﻋﺮق رﺋﻴﺴﻲ د( ﻋﺮق ﺛﺎﻧﻮي ه(ﻧﺴﻴﺞ ﺑﺮاﻧﺸﻴﻤﻲ )ﺗﻜﺒﲑ 100 ﻣﺮة(. 38 ب

57 ا ا ا ا ج وا د اﻟﺸﻜﻞ :16 ج( ﺷﻜﻞ اﻟﺜﻐﻮر وﺗﻮزﻋﻬﺎ ﻋﻠﻰ ﺑﺸﺮة اﻟﻮﺟﻪ اﻟﺴﻔﻠﻲ ﻟﻠﻮرﻗﺔ د( ﺗﻜﺒﲑ ﻷﺣﺪ ﻫﺬﻩ اﻟﺜﻐﻮر )ﺗﻜﺒﲑ 400 ﻣﺮة ( اﺳﺘﺨﻼص اﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ : ﺑﻌﺪ اﻹﻧﺘﻬﺎء ﻣﻦ ﻋﻤﻠﻴﺔ اﺳﺘﺨﻼص اﻟﺰﻳﺖ اﻟﻄﻴﺎر ﻣﻦ اﳉﺰء اﳍﻮاﺋﻲ ﻟﻠﻨﺒﺘﺔ campestris L ) Artemisia ﰎ اﺳﺘﺨﺪام غ ﻣﻦ اﳉﺰء اﳍﻮاﺋﻲ ﻟﻠﻨﺒﺘﺔ( اﻟﱵ اﺳﺘﻐﺮﻗﺖ ﺣﻮاﱄ ﺛﻼﺛﺔ ﺳﺎﻋﺎت ﺑﻌﺪ ﻏﻠﻴﺎن اﳌﺎء ﰎ اﳊﺼﻮل ﻋﻠﻰ زﻳﺖ أﺳﺎﺳﻲ أﺻﻔﺮ اﻟﻠﻮن ﻗﻮي اﻟﺮاﺋﺤﺔ وزﻧﻪ ﻳﺴﺎوي al غ وﻋﻨﺪ ﺣﺴﺎب اﳌﺮدود وﺟﺪ أﻧﻪ وﻫﻮ ﻳﻮاﻓﻖ اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ اﻟﱵ ﲢﺼﻞ ﻋﻠﻴﻬﺎ ﻛﻞ ﻣﻦ (2003) Akrout et al و ) (2003 ﺑﺎﳌﻘﺎرﻧﺔ ﻣﻊ اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ اﻟﱵ ﺗﻮﺻﻞ إﻟﻴﻬﺎ اﻟﺰﻳﺖ اﻻﺳﺎﺳﻲ ﻟﻠﻨﺒﺘﺔ campestris Belhattab et al Chalchat et ) (2011 ﰲ ﻋﻤﻠﻴﺔ اﺳﺘﺨﻼص Artemisia اﻟﱵ ﲨﻌﺖ ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ ﺑﻮﺳﻌﺎدة ﻟﻮﺣﻆ أن اﳌﺮدود ﻛﺎن أﻛﱪ إذ ﻛﺎن ﻳﺴﺎوي 0.66 ﲢﺼﻞ (2013) Ghorab et al ﻋﻨﺪ اﺳﺘﺨﺪاﻣﻪ 100 غ ﻣﻦ اﳉﺰء اﳍﻮاﺋﻲ ﻟﻠﻨﺒﺘﺔ campestris Artemisia ﲨﻌﺖ ﻣﻦ وﻻﻳﺔ ﺧﻨﺸﻠﺔ ﻋﻠﻰ ﻣﺮدود ﻳﺴﺎوي. 1.0 ﻫﻨﺎك اﻟﻜﺜﲑ ﻣﻦ اﻟﻌﻮاﻣﻞ اﻟﱵ ﺗﺆﺛﺮ ﻋﻠﻰ اﻟﻜﻤﻴﺔ اﻟﱵ ﻳﻨﺘﺠﻬﺎ اﻟﻨﺒﺎت ﻣﻦ اﻟﺰﻳﺖ اﻻﺳﺎﺳﻲ ﺧﺎﺻﺔ اﻟﺒﻴﺌﻴﺔ ﻣﻨﻬﺎ ﻣﺜﻞ اﳊﺮارة اﻟﺮﻃﻮﺑﺔ اﻟﻌﻀﻮ اﻟﻨﺒﺎﰐ اﳌﺴﺘﺨﺪم وﻗﺖ ﺟﲏ اﻟﻨﺒﺎت ﻋﻤﺮ اﻟﻨﺒﺎت وﻃﻮر اﻟﻨﻤﻮ)ﻫﻴﻜﻞ وﻋﻤﺮ ( Lamendin et al., 2004 ; اﻟﻨﺸﺎﻃﻴﺔ اﻟﻀﺪ ﺑﻜﺘﻴﺮﻳﺔ ﻟﻠﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ : إن ﻇﻬﻮر ﺳﻼﻻت ﻣﻘﺎوﻣﺔ ﻟﻠﻤﻀﺎدات اﳊﻴﻮﻳﺔ أدى اﱃ اﻟﺒﺤﺚ ﻋﻦ ﺑﺪاﺋﻞ ﳍﺬﻩ اﳌﻀﺎدات اﻟﺰﻳﻮت اﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ﻣﺮﺷﺤﺔ ﳏﺘﻤﻠﺔ ﻟﺘﻘﻮم ﺑﺪور ﻣﻀﺎدات ﻟﻠﻤﻴﻜﺮوﺑﺎت وﻫﺬا ﺑﻔﻀﻞ ﺗﻨﻮﻋﻬﺎ اﻟﻜﻴﻤﻴﺎﺋﻲ اﻟﻜﺒﲑ ﻣﺎﳝﻨﻊ ﺗﻜﻴﻒ اﳌﻴﻜﺮوﺑﺎت اﳌﺴﺒﺒﺔ ﻟﻸﻣﺮاض وﻳﻘﻠﻞ ﻣﻦ ﻣﻘﺎوﻣﺘﻬﺎ 39 ).(De Billerbeck, 2007

58 ا اا ا وا ولهذه الغاية اقترحنا اختبار الزيت الا ساسي الذي تحصلنا عليه من نبتة Artemisia campestris مجموعة من سلالات مختلفة وتشمل سلالات مقاومة للمضادات الحيوية. ضد (03) النتاي ج مبينة في الجدولين (02) للنبتة الضد بكتيرية و يجب الاشارة الى أن الا بحاث التي اهتمت بدراسة النشاطية Ben Sassi et al., 2007 ; Naili et al., ) قليلة جدا Artemisia campestris.(2010 Artemisia campestris الجدول -02-: بالميليمتر. النشاطية الضد بكتيرية للزيت الا ساسي للنبتة معبر عنها التركيز (ح/ح) الشاهد DMSO % 100 % 50 % 20 (ملم) السلالات البكتيرية Staphylococcus aureus ATCC Escherichia coli ATCC Bacillus subtilis ATCC Pseudomonasaeruginosa ATCC27853 الجدول -03-: النشاطية الضد بكتيرية للمضادات الحيوية المعبر عنها بقطر التثبيط بالميليمتر. المضادات الحيوية E OX P C GM السلالات البكتيرية Staphylococcus aureus ATCC Escherichia coli ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Bacillus subtilis ATCC 6633 حددت النشاطية ضد بكتيرية للزيت الا ساسي لنبتة Artemisia campestris تم التوصل الى أن بكتيريا بحساب قطر التثبيط وقد S.aureus ATCC هي الوحيدة التي كانت حساسة لزيت الا ساسي 40

59 ا ا ا وا ا أﻣﺎ ﺑﺎﻗﻲ اﻟﺴﻼﻻت ﻓﻘﺪ أﺑﺪت ﻣﻘﺎوﻣﺔ ﺗﺎﻣﺔ إذ ﱂ ﻳﻜﻦ ﻟﻠﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ أي ﺗﺄﺛﲑ ﻋﻠﻰ ﻫﺬﻩ اﻟﺴﻼﻻت )ﲟﺨﺘﻠﻒ اﻟﱰاﻛﻴﺰ( اﻟﺸﻜﻞ.17 أ ب ج د ه و اﻟﺸﻜﻞ :17 ﺗﺄﺛﲑ اﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ ﻋﻠﻰ : أ S.aureus ATCC : ﺑﱰﻛﻴﺰ.% 20 ب S.aureus ATCC : ﺑﱰﻛﻴﺰ.% 50 ج S.aureus ATCC : ﺑﱰﻛﻴﺰ.% 100 د E. coli ATCC : ﺑﱰﻛﻴﺰ.%100 ه aeruginosa ATCC27853 : و B. subtilis ATCC 6633: ﻛﺎن ﻟﻠﺴﻼﻟﺔ P. ﺣﻴﺖ وﺟﺪﻧﺎ أ ﺎ ﻻﺗﺘﺄﺛﺮ ﺑﺎﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ ﰲ ﳐﺘﻠﻒ ﺣﻴﺖ وﺟﺪﻧﺎ أ ﺎ ﻻﺗﺘﺄﺛﺮ ﺑﺎﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ ﰲ ﳐﺘﻠﻒ S.aureus ATCC اﻟﱰاﻛﻴﺰ. اﻟﱰاﻛﻴﺰ. ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ اﲡﺎﻩ اﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ ﻣﻌﱪ ﻋﻨﻬﺎ ﺑﺄﻗﻄﺎر ﺗﺜﺒﻴﻂ ﳐﺘﻠﻔﺔ ﺣﺴﺐ ﺗﺮﻛﻴﺰ اﻟﺰﻳﺖ اﻷﺳﺎﺳﻲ ﻓﻜﻠﻤﺎ زاد اﻟﱰﻛﻴﺰ زاد ﻗﻄﺮ اﻟﺘﺜﺒﻴﻂ إذ ﻗﺪرت ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ 41